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酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELASA)具體操作步驟
更新時間:2019-03-29   點擊次數(shù):8520次

酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELASA)具體操作步驟

ELASA是一種用酶標記抗原或抗體,在固相反應板上進行抗原抗體反應的方法。常用于檢測體液中的微量抗原和抗體,具有靈敏度高、特異性強、操作簡單、容易判斷等優(yōu)點。其檢測方法、注意事項、結(jié)果分析等詳見檢測試劑的說明書。本實驗以雙抗體夾心法為例檢測乙型肝炎病毒表面抗原介紹如下:

實驗目的

要求了解試驗原理,試驗方法及結(jié)果分析。

實驗材料

1.標本:待檢人血清

2.試劑:酶標抗體(抗HBs)、HBsAg陽性對照血清、陰性對照、洗滌液、顯色劑A、B,終止液

3.器材:已被抗體包被的微量反應板(48孔)、微量移液管、酶標儀等。

實驗內(nèi)容與方法

1.在微量反應板每孔加入待檢標本50μl,設(shè)陽性、陰性對照各2孔,每孔加入陽性(或陰性)對照各1滴,并設(shè)空白對照1孔。

2.每孔加入酶結(jié)合物1滴(空白對照除外),充分混勻,封板,置37℃孵育30分鐘。

3.棄去孔內(nèi)液體,洗滌液注滿各孔,靜置5秒,甩干,重復5次后拍干。

4.每孔加顯色劑A液、B液各1滴,充分混勻,封板,置37℃孵育15分鐘。

5.每孔加終止液1滴,充分混勻。

6.用酶標儀讀數(shù),取波長450nm,先用空白孔校零,然后讀取各孔OD值。

實驗結(jié)果與評價

樣品OD值≥2.1陰性對照平均OD值,判斷為陽性,否則為陰性。陰性對照OD值低于0.05作0.05計算,高于0.05按實際OD值計算。

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