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免疫組化實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題和解決方法

 
免疫組化實(shí)驗(yàn)的不順心是否讓你很苦惱，來(lái)看看基免生物為你支招解決各種免疫組化的疑難雜癥！！

染色過(guò)強(qiáng)

原因 解決方法 
抗體的濃度過(guò)高或抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 降低抗體滴度（一般指濃縮性抗體） 抗體孵育時(shí)間：室溫1小時(shí)或4℃過(guò)ye
 
孵育溫度過(guò)高，孵育溫度超過(guò)37℃ 一般室溫20-28℃ 
DAB 顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或 DAB 濃度過(guò)高 顯色時(shí)間不能超過(guò)5-10分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn) 

非特異性背景染色

原因 解決方法 
操作過(guò)程中沖洗不充分 每步?jīng)_洗3×5 
組織中含過(guò)氧化物酶未阻斷 可再配置新鮮3%H2O2封閉，孵育時(shí)間延長(zhǎng) 
組織中含內(nèi)源性生物素 正常非免疫動(dòng)物血清再封閉 
血清蛋白封閉不充分 延長(zhǎng)血清蛋白封閉時(shí)間 

染色弱

原因 解決方法 
抗體濃度過(guò)低，孵育時(shí)間過(guò)短 提高抗體濃度，孵育時(shí)間不能少于60分鐘 
試劑超過(guò)有效使用期 及時(shí)更換試劑 
操作中，滴加試劑時(shí)緩沖液未瀝干，致使試劑稀釋 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液（但防止切片干燥） 
室溫太低，低于15℃ 若室溫低于15度，要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘（或4℃冰箱過(guò)ye） 
蛋白封閉過(guò)度 封閉時(shí)間不要超過(guò)10分鐘 

染色陰性

原因 解決方法 
操作步驟錯(cuò)誤 重新試驗(yàn)，設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照 
組織中無(wú)抗原 設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照片，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果 
一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤 仔細(xì)確定一抗與二抗種屬無(wú)誤 

對(duì)實(shí)驗(yàn)有任何問(wèn)題和建議，對(duì)公司產(chǎn)品有任何疑問(wèn)的，都咨詢或在線咨詢，上海基免生物竭誠(chéng)為您服務(wù)！